| 靈芝的藥理作用 |
| 【 整理發(fā)布：王力野生靈芝網(wǎng) 】 【 發(fā)布日期：7/6/2011 】 瀏覽次數(shù):2102 |
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采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)與方法研究靈芝的藥理作用，闡明其作用機(jī)制，具有重大意義。一方面它可為臨床應(yīng)用靈芝防治疾病奠定理論基礎(chǔ)，有助于提高療效和擴(kuò)大其應(yīng)用范圍；另一方面為靈芝類新藥和保健品開發(fā)提供科學(xué)資料，有助于確保新藥質(zhì)量，使之安全、有效。此外，靈芝的藥理研究還為中西醫(yī)結(jié)合的理論研究提供了新的資料。近二十年來國內(nèi)外的大量研究結(jié)果證明，靈芝具有廣泛的藥理作用，且毒性極低。這與中醫(yī)藥學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)靈芝的療效和毒副作用的認(rèn)識(shí)是一致的。
第一節(jié) 抗腫瘤作用
靈芝對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的移植性腫瘤具有顯著的抑制作用。
Sasaki等（1971）發(fā)現(xiàn)，從樹舌子實(shí)體中分離出的多糖成分G—Z對(duì)小鼠肉瘤S180有抑制作用，抑制率為54.7%。隨后，Ohtsuka等（1976）、Hitoshi等（1977）、佐藤等（1977）亦先后報(bào)告，鐵杉靈芝(Ganoderma tsugae)和島靈芝(Ganoderma boninense)菌絲體所含多糖、靈芝中提取出的四種含少量蛋白質(zhì)的多糖、赤芝熱水提取物對(duì)小鼠肉瘤S180均有顯著抑制作用。Maruyama等報(bào)告，腹腔注射或灌胃赤芝水提物對(duì)小鼠肉瘤S180均有抗種瘤作用，而醇溶部分無效。分子量大于10 000者有效，小于10 000者無效。Kim等（1981）也報(bào)告，從朝鮮產(chǎn)靈芝中提取的一種由4種單糖和18種氨基酸組成的多糖和蛋白質(zhì)的混合物可抑制小鼠肉瘤S180的生長，抑瘤率達(dá)87.6%，其中三分之一小鼠的腫瘤完全消退。
Kang等（1981）發(fā)現(xiàn)，從靈芝菌絲體中提取出的一種蛋白多糖不僅可抑制小鼠肉瘤S180生長，而且腹腔注射5d后，經(jīng)羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫的小鼠脾臟空斑形成細(xì)胞（PFC）數(shù)較對(duì)照組顯著增加，表明此多糖可提高荷瘤小鼠的免疫功能。
高斌等（1989）用從樹舌子實(shí)體中提取的樹舌多糖研究了其抑瘤作用和機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樹舌多糖可降低小鼠荷瘤率，減輕瘤重。并認(rèn)為其抑瘤作用可能與增強(qiáng)體內(nèi)自然殺傷細(xì)胞（NK）活性和促進(jìn)T輔助細(xì)胞Th）產(chǎn)生白細(xì)胞介素質(zhì)2（IL-2）、γ-干擾素有關(guān)。
李旭生等證明，靈芝菌絲體提取物（GLP）對(duì)C3H小鼠的肌纖維惡性腫瘤有明顯的抑瘤作用，而且對(duì)肺部轉(zhuǎn)移病灶亦有抑制作用。體外試驗(yàn)時(shí)，GLP對(duì)P3HR-1細(xì)胞與腦膜瘤細(xì)胞亦有抑制作用。隨后，他們進(jìn)一步證明，靈芝菌絲體酒精萃取的不溶性物（GL-AI）可能增強(qiáng)正常小鼠和荷瘤小鼠脾臟自然殺傷細(xì)胞（NK）的殺傷活性。且無論口服、腹腔注射或靜脈注射均有效。腹腔注射40mg/kg有GL-AI15h后即顯著增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的殺傷活性，48h達(dá)高峰，作用可維持96h。GL-AI在增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的活性同時(shí)，亦促進(jìn)小鼠干擾素的產(chǎn)生。
蔡宗統(tǒng)（1991）指出，三種臺(tái)灣產(chǎn)靈芝（無柄靈芝、古梅靈芝、猴板凳）水提液經(jīng)灌胃給藥后，在預(yù)防癌癥發(fā)生模式、癌癥初期治療模式、癌癥后期治療模式中，均有抑瘤效果。
Toth等（1983）報(bào)告，從赤芝菌絲體中提取的六種三萜類細(xì)胞毒物質(zhì)（ganoderic acid U,V,W,X,Z)，在體外明顯抑制肝肉瘤（HTC）細(xì)胞生長。
以上結(jié)果證明靈芝具有抗腫瘤作用，而靈芝多糖是其抗腫瘤作用的主要有效成分，其抗腫瘤作用機(jī)制可能是宿主中介性的，即通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能而實(shí)現(xiàn)。
第二節(jié) 免疫調(diào)節(jié)作用
一、提高機(jī)體的非特異性免疫功能
我們?cè)^察了從靈芝子實(shí)體中提取的靈芝液和靈芝多糖D6對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活力的影響。結(jié)果證明，靈芝液和靈芝多糖D6均能明顯提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅血球的能力，吞噬百分率和吞噬指數(shù)均較對(duì)照組為高。我們還發(fā)現(xiàn)，從松杉樹芝（鐵杉靈芝）子實(shí)體和菌絲體中提取的多糖能恢復(fù)小鼠因注射氫化可的松而降低的靜脈注射的碳粒廓清速率。
顧立剛等（1990）的實(shí)驗(yàn)證明，從薄蓋靈芝菌絲體提取制成的注射液（簡稱薄芝液）與小鼠腹腔巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)24h后，在劑量適宜時(shí)（5～20μl/ml）可增加巨噬細(xì)胞對(duì)中性紅的吞噬功能，并增加巨噬細(xì)胞內(nèi)溶菌酶的含量。此外，薄芝液還能協(xié)同LPS增強(qiáng)巨噬細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素1（IL-1）的能力。
高斌等（1989）亦證明，樹舌多糖在體外亦能促使巨噬細(xì)胞分泌IL-1樣物質(zhì)。
二、增強(qiáng)機(jī)體體液免疫功能
我們?cè)匝蚣t細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)的小鼠空斑形成細(xì)胞（PFC）反應(yīng)為指標(biāo)，觀察幾種靈芝多糖對(duì)正常小鼠和各種誘因所致免疫功能抑制小鼠的體液免疫功能的影響。靈芝多糖BN3C（5mg/kg）連續(xù)腹腔注射5d，能顯著促進(jìn)PFC反應(yīng)。14月齡小鼠的PFC反應(yīng)較3月齡小鼠明顯降低，靈芝多糖BN3A、BN3B和BN3C(5mg/kg)連續(xù)腹腔注射5d，可使14月齡小鼠降低的PFC反應(yīng)明顯恢復(fù)（表7-1）。
表7-1 靈芝多糖BN3A、BN3B和BN3C對(duì)14月齡
小鼠空斑形成細(xì)胞（PFC）反應(yīng)的影響
鼠齡
（月）
藥物
劑量
mg/(kg·d),ip
PFC×106脾細(xì)胞
3
對(duì)照
-
2061±309
14
對(duì)照
-
864±386+++
14
BN3A
5×5
1957±392***
14
BN3B
5×5
1792±577**
14
BN3C
5×5
1405±336*
x - ±s,n=6,+++P<0.001與3月齡對(duì)照比較,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001與14月齡對(duì)照比較。
松杉樹芝子實(shí)體多糖（10～100mg/kg）連續(xù)灌胃給藥4d可顯著增加小鼠抗SRBC PFC數(shù)目；在注射環(huán)磷酰胺引起免疫功能抑制的小鼠，連續(xù)灌胃松杉樹芝子實(shí)體多糖（100mg/kg，200mg/kg）4d，能使降低的PFC反應(yīng)部分恢復(fù)；強(qiáng)迫小鼠每日在冷水中游泳8～10d，因應(yīng)激可引起小鼠免疫功能顯著降低，如在應(yīng)激同時(shí)給予松杉樹芝子實(shí)體多糖則可完全對(duì)抗應(yīng)激所致PFC反應(yīng)降低（表7-2）。從松杉樹芝菌絲體和發(fā)酵液中所獲多糖亦有類似作用。
表7-2 松杉樹芝子實(shí)體多糖對(duì)應(yīng)激所致免疫功能抑制
小鼠的空斑形成細(xì)胞（PFC）反應(yīng)的影響
組別
劑量
mg/(kg·d),ip
鼠數(shù)
PFC×106脾細(xì)胞
x - ±s
對(duì)照
-
7
1222±283
應(yīng)激對(duì)照
-
7
798±121**
松杉樹芝多糖+應(yīng)激
25×8
6
1356±440++
松杉樹芝多糖+應(yīng)激
50×8
6
1396±349++
松杉樹芝多糖+應(yīng)激
100×8
6
1416±518++
**P<0.01與對(duì)照組比較，++P<0.01與應(yīng)激對(duì)照組比較。
我們還發(fā)現(xiàn)，每日給小鼠腹腔注射靈芝多糖GL-B（25～100mg/kg），共4d，可明顯增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞對(duì)LPS刺激的增殖反應(yīng)。當(dāng)GL-B為100mg/kg時(shí)，脾細(xì)胞增殖反應(yīng)較對(duì)照組增加84.8%。結(jié)果表明，GL-B可增強(qiáng)B淋巴細(xì)胞對(duì)LPS刺激的敏感性。
與多糖成分不同，Kino等（1991）報(bào)告，當(dāng)小鼠用乙肝表面抗原（HBsAg)1μg/只免疫后，第7d開始腹腔注射靈芝蛋白LZ-812mg/kg每周兩次，直至第28d可抑制抗HBsAg抗體的產(chǎn)生。
三、增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能
Nakashima等（1979）觀察了樹舌多糖對(duì)細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響。給ddy/s小鼠皮下注射甲基化的細(xì)胞α-淀粉酶和不完全的Freund's佐劑（M-BaA-IFA）后，僅產(chǎn)生微弱的足爪腫脹反應(yīng)；但注射甲基化細(xì)菌α-淀粉酶和完全的Freund's佐劑（M-BaA-CFA）則引起明顯的足爪腫脹反應(yīng)。預(yù)先給小鼠腹腔注射樹舌多糖30mg/kg，則能顯著增加（M-BaA-IFA）引起的這種遲發(fā)型過敏反應(yīng)，使其反應(yīng)程度可達(dá)M-BaA-CFA所致程度。但劑量增至60 mg/kg時(shí)，這種增強(qiáng)作用反減弱。樹舌多糖增強(qiáng)M-BaA-IFA誘發(fā)的遲發(fā)型過敏反應(yīng)是由于激活非特異性的有擴(kuò)大細(xì)胞免疫反應(yīng)的T細(xì)胞（amplifier T-cells）所致。
我們發(fā)現(xiàn)，灌胃松杉樹芝多糖（50～200mg/kg）可顯著增強(qiáng)二硝基氯苯（DNCB）所致小鼠遲發(fā)型皮膚過敏反應(yīng)（DCH），拮抗環(huán)磷酰胺對(duì)DCH的抑制作用。每日強(qiáng)迫小鼠在冷水中游泳5min，共10d，即出現(xiàn)明顯的應(yīng)激性免疫功能抑制，DCH反應(yīng)可降低50%左右。在應(yīng)激同時(shí)，每日灌胃松杉樹芝多糖（50mg/kg，100mg/kg）可使DCH反應(yīng)維持在接近正常的水平。表明松杉樹芝多糖可拮抗應(yīng)激所致細(xì)胞免疫功能抑制。從松杉樹芝菌絲體和發(fā)酵液中所獲多糖亦有類似的增強(qiáng)細(xì)胞免疫效應(yīng)作用。
我們還證明，靈芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（1μg/ml，5μg/ml）均可顯著促進(jìn)刀豆素A（ConA）誘導(dǎo)的C57BL/6j小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。在濃度為30μg/ml時(shí)，BN3A和BN3C還可部分拮抗氫化可的松對(duì)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的抑制作用。我們還發(fā)現(xiàn)，與3月齡小鼠相比，14月齡小鼠的ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)降低26.5%，此三種多糖在濃度為1和2.5μg/ml時(shí)，均可使之顯著恢復(fù)。最近，我們以同種異型抗原刺激的混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)（MLR）為模型，觀察靈芝多糖GL—B對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響。結(jié)果證明，GL—B（50～800μg/ml）可濃度依賴性的促進(jìn)小鼠的MLR，并可反轉(zhuǎn)小劑量環(huán)孢霉素A（0.01μg/ml)對(duì)MLR的抑制作用，并使之恢復(fù)正常。當(dāng)環(huán)孢霉素A的濃度增至0.1～1μg/ml時(shí)，對(duì)MLR的抑制作用達(dá)80%，對(duì)此GL—B幾無拮抗作用。GL—B亦可部分拮抗氫化可的松對(duì)MLR的抑制作用�？鼓[瘤藥氟尿嘧啶、絲裂霉素C和阿糖胞苷均可明顯抑制MLR，GL—B可劑量依賴性地拮抗這些藥物對(duì)MLR的抑制作用（表7-3）。同樣，我們亦發(fā)現(xiàn)，24月齡小鼠的MLR較3月齡小鼠降低35.3%，GL—B可使之恢復(fù)（表7-4）。
表7-3 靈芝多糖GL—B對(duì)絲裂霉素C、氟尿嘧啶和阿糖胞苷
所致混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）抑制的恢復(fù)作用
組別
藥物濃度（μg/ml）
[3H]TdR攝�。╠pm）
對(duì)照
-
31361±4242
絲裂霉素C（抑制對(duì)照）
0.01
16842±1266+++
絲裂霉素C+GL-B
0.01+50
19003±978**
絲裂霉素C+GL-B
0.01+100
24209±1505***
絲裂霉素C+GL-B
0.01+200
27606±2372***
對(duì)照
-
28946±1527
5-氟尿嘧啶（抑制對(duì)照）
0.1
16250±1614+++
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+50
20875±1750***
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+100
26201±2130***
5-氟尿嘧啶+GL-B
0.1+200
28823±1728***
對(duì)照
-
23678±1348
阿糖胞苷（抑制對(duì)照）
0.01
13092±1973+++
阿糖胞苷+GL-B
0.01+50
17658±2420**
阿糖胞苷+GL-B
0.01+100
24380±2949***
阿糖胞苷+GL-B
0.01+200
30030±4649***
x - ±s,n=6,+++P<0.001與對(duì)照比較, **P<0.01,***P<0.001與抑制對(duì)照比較。
表7-4 靈芝多糖GL—B對(duì)24月齡老年小鼠的同種
異型抗原刺激的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）的影響
組別
鼠齡（月）
濃度（μg/ml）
[3H]TdR攝取×10-3（dpm）
年輕對(duì)照
3
-
45.4±2.1
老年對(duì)照
24
-
19.4±3.8+++
GL-B
24
50
34.8±4.5
GL-B
24
100
36.1±2.6***
GL-B
24
200
40.2±4.2***
x - ±s,n=6,+++P<0.001與年輕對(duì)照比較,**P<0.01,***P<0.001與老年對(duì)照比較。
我們還采用抗L3T4及抗Lyt2單克隆抗體和間接熒光免疫法檢測(cè)了混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中T細(xì)胞亞類的數(shù)量。結(jié)果指出，GL—B（50～200μg/ml）可顯著增加其中總T細(xì)胞的回收量以及L3T4+細(xì)胞和Lyt2+細(xì)胞的回收量，Lyt2+細(xì)胞的百分比亦明顯增加�？瞻邷p少試驗(yàn)還顯示，GL—B可顯著增強(qiáng)細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL）的功能，在濃度為200μg/ml時(shí)，其殺傷活性增加100%。小鼠L3T4+細(xì)胞屬于T輔助細(xì)胞（Th），這一結(jié)果說明，GL—B能促使Th細(xì)胞增殖。而T抑制細(xì)胞（Ts）和CTL均帶有Lyt2+抗原，故GL—B促進(jìn)Lyt2+細(xì)胞增殖的確切含義尚待研究，但由于我們又觀察到GL—B可增強(qiáng)CTL的殺傷活性，表明GL—B增加的Lyt2+細(xì)胞中，至少有一部分屬于CTL細(xì)胞。
體外試驗(yàn)亦證明，樹舌多糖可增強(qiáng)ConA刺激的小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)。薄芝液對(duì)ConA刺激的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響視所用濃度而異，低濃度（1.5μg/ml）時(shí)有促進(jìn)作用，高濃度（25μg/ml）則抑制之。
靈芝蛋白LZ—8在體外對(duì)小鼠脾細(xì)胞有強(qiáng)大的促有絲分裂作用，最適刺激濃度為3.3μg/ml。LZ—8尚可增強(qiáng)ConA和LPS的促有絲分裂作用。
四、促進(jìn)免疫細(xì)胞因子的產(chǎn)生
我們發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（0.05～1μg/ml）均可顯著增加C57BL/6j小鼠脾細(xì)胞在ConA存在條件下的IL—2產(chǎn)生，并可部分地拮抗環(huán)孢霉素A和氫化可的松對(duì)小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生IL—2的抑制作用。與3月齡小鼠比較，19月齡小鼠脾細(xì)胞IL—2產(chǎn)生減少17.6%～20.3%，此三種多糖均可使之恢復(fù)至3月齡小鼠的正常水平。
在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中，T輔助細(xì)胞（Th）受到同種異型抗原刺激后，在巨噬細(xì)胞分泌的IL—1協(xié)同下，發(fā)生增殖反應(yīng)并合成分泌IL—2。在反應(yīng)體系中加入終濃度為200μg/ml的GL—B，其作用呈雙向反應(yīng)。即在培養(yǎng)的前24h，GL—B可促進(jìn)脾細(xì)胞合成分泌IL—2，24h以后則逐漸減少合成分泌IL—2。當(dāng)固定培養(yǎng)時(shí)間為12h，改變GL—B的濃度，則可見GL—B呈濃度依賴性地促進(jìn)脾細(xì)胞合成分泌IL—2（表7-5）。由于GL—B對(duì)IL—2依賴株HT2細(xì)胞以及同種異型抗原或ConA活化的脾細(xì)胞均無促增殖作用，故我們認(rèn)為GL—B不能促進(jìn)活化細(xì)胞的IL—2受體表達(dá)。
表7-5 靈芝多糖GL—B對(duì)小鼠混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液
中白細(xì)胞介素質(zhì)2（IL—2）活性的影響
組別
濃度（μg/ml）
IL-2活性（dpm）
對(duì)照
-
2044±167
GL-B
25
2386±208*
GL-B
50
2930±125***
GL-B
100
3044±192***
GL-B
200
3607±339***
x - ±s,n=6,*P<0.05, ***P<0.001與對(duì)照比較。
最近，我們證實(shí)，未純化的小鼠脾細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)可發(fā)生自發(fā)性增殖，即自身混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)（A MLR），GL—B亦可顯著促進(jìn)這種反應(yīng)。而更為有意義的是，24月齡老年小鼠的未純化脾細(xì)胞的自發(fā)性增殖和IL—2分泌均較3月齡年輕小鼠顯著減少，而GL—B則可劑量依賴性地使之逐漸恢復(fù)（表7-6）。
表7-6 靈芝多糖GL—B對(duì)老年小鼠脾細(xì)胞自發(fā)增殖和
白細(xì)胞介素質(zhì)2（IL—2）產(chǎn)生的影響
組別
鼠齡
（月）
濃度
（μg/ml）
[3H]TdR攝取×10-3
（dpm）
IL-2活性×10-3
（dpm）
年輕對(duì)照
3
-
24.8±4.7
8.3±1.4
老年對(duì)照
24
-
18.0±3.4+
5.8±1.0+
GL-B
24
50
22.1±2.7*
7.3±1.2*
GL-B
24
100
24.9±3.8**
8.2±1.0**
GL-B
24
200
26.4±2.4***
9.0±1.0***
x - ±s,n=6,+P<0.001與年輕對(duì)照比較,*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001與老年對(duì)照比較。
我們還發(fā)現(xiàn)，GL—B與小鼠腹腔滲出細(xì)胞（主要為巨噬細(xì)胞）共同培養(yǎng)24h后，上清液和腹腔滲出細(xì)胞內(nèi)IL—1明顯增加，說明GL—B可促進(jìn)腹腔滲出細(xì)胞合成和分泌IL—1（表7-7）。
表7-7 靈芝多糖GL—B對(duì)小鼠腹腔滲出細(xì)胞合成和分泌
白細(xì)胞介素質(zhì)1（IL—1）的影響
組別
濃度
（μg/ml）
IL-1活性（dpm）
上清液
細(xì)胞內(nèi)
對(duì)照
-
9328±752
17805±1893
GL-B
50
12290±1176***
18641±2042
GL-B
100
15046±1645***
20908±2122*
GL-B
200
16759±2786***
23218±1530***
x - ±s,n=6,*P<0.05，***P<0.001與對(duì)照比較。
最近，我們用Northern印跡轉(zhuǎn)移雜交法觀察GL—B對(duì)小鼠脾細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子和原癌基因mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果證明，給小鼠灌胃GL—B（100mg/ml）7d，可明顯促進(jìn)脾細(xì)胞中細(xì)胞因子IL—2、IL—6、腫瘤壞死因（TNF）和原癌基因C-myc的mRNA表達(dá)，使表達(dá)量增加（表7-8）。這一結(jié)果在分子水平進(jìn)一步證實(shí)了靈芝多糖的免疫調(diào)節(jié)作用。
表7-8 GL—B對(duì)小鼠脾細(xì)胞中IL—2、IL—6、TNF和
C-myc mRNA表達(dá)的影響
觀察指標(biāo)
組別
劑量(mg/kg, ig×d)
mRNA水平（%）
IL-2
對(duì)照
-
100.00±1.45
GL-B
100×7
166.69±7.26***
IL-6
對(duì)照
-
100.00±12.28
GL-B
100×7
195.36±69.40*
TNF
對(duì)照
-
100.00±16.95
GL-B
100×7
183.09±7.82***
C-myc
對(duì)照
-
100.00±7.58
GL-B
100×7
149.50±27.43*
x - ±s,n=4,*P<0.05，***P<0.001與對(duì)照組比較。
樹舌多糖（20mg/kg），皮下注射可提高荷瘤小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生IL—2和干擾素的能力。
薄芝液對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞IL—2的產(chǎn)生呈現(xiàn)雙向作用，小劑量（1.5μg/ml）促進(jìn)，大劑量（25μg/ml）抑制。
五、增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的DNA多聚酶α活性
由于靈芝多糖GL—B能促進(jìn)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系中的脾細(xì)胞攝取[3H]TdR，表明它可以促進(jìn)脾細(xì)胞的DNA合成。為了進(jìn)一步觀察GL—B促進(jìn)淋巴細(xì)胞DNA合成的機(jī)制，我們觀察了GL—B對(duì)脾淋巴細(xì)胞DNA多聚酶活性的影響。仍采用MLR為模型，當(dāng)GL—B與細(xì)胞共同培養(yǎng)3d后，收集脾細(xì)胞，測(cè)細(xì)胞內(nèi)DNA多聚酶α的活性。結(jié)果可見，在濃度為62～250μg/ml時(shí)，GL—B在促進(jìn)MLR的同時(shí)，可明顯增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞DNA多聚酶α的活性。我們還采用無細(xì)胞體系觀察GL—B對(duì)DNA多聚酶α本身有無影響，結(jié)果表明，上述濃度的GL—B對(duì)無細(xì)胞體系中該酶活性不僅無增強(qiáng)作用，反而有輕度抑制作用。這種相反的結(jié)果提示，在細(xì)胞水平，GL—B可能通過某種間接機(jī)制誘導(dǎo)DNA多聚酶α的合成，從而使其活性增加。
最近，我們發(fā)現(xiàn)24月齡老年小鼠脾細(xì)胞的DNA多聚酶α活性較3月齡年輕小鼠降低35.6%～43.3%，這一發(fā)現(xiàn)可能是老年免疫功能缺陷在分子水平的表現(xiàn)。每日給老年小鼠腹腔注射GL—B25mg/kg，50mg/kg，連續(xù)給藥4d，可顯著增強(qiáng)老年小鼠脾細(xì)胞的DNA多聚酶α活性，并使之趨于正常（表7-9）。靈芝多糖的這一重要作用不僅是其恢復(fù)老年性免疫功能缺陷作用的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，而且也是其抗衰老作用的重要環(huán)節(jié)。
表7-9 腹腔注射靈芝多糖GL—B對(duì)老年小鼠脾細(xì)胞DNA多聚酶α活性的影響
組別
鼠齡（月）
劑量
（mg/(kg·d)
DNA多聚糖α活性
（U/1010脾細(xì)胞）
年輕對(duì)照
3
-
16.3±3.2
老年對(duì)照
24
-
9.2±2.4+++
GL-B
24
25×4
13.3±3.0**
GL-B
24
50×4
14.6±3.6**
x - ±s,n=6,+++P<0.001與年輕對(duì)照比較，*P<0.05，**P<0.01與老年對(duì)照比較。
六、抗過敏作用
我們?cè)谧C明赤芝發(fā)酵濃縮液能顯著地抑制卵蛋白抗血清及破傷風(fēng)抗血清被動(dòng)致敏皮膚反應(yīng)的基礎(chǔ)上，觀察了赤芝發(fā)酵濃縮液及其不同提取部分對(duì)卵蛋白及破傷風(fēng)類毒素主動(dòng)致敏豚鼠肺組織釋放組織胺及過敏的慢反應(yīng)物質(zhì)（SRS—A）的影響。結(jié)果證明，赤芝發(fā)酵濃縮液能顯著地抑制這兩種過敏反應(yīng)介質(zhì)的釋放，且其作用強(qiáng)度與所用藥物濃度成正比。從靈芝發(fā)酵濃縮液中提出的酸性物I和II可能是這一作用的有效組分。G.sp.發(fā)酵液也能顯著地抑制卵蛋白主動(dòng)致敏豚鼠肺組織釋放組織胺。
Kino等（1989）用小牛血清（BSA）加佐劑經(jīng)皮下或腹腔注射致敏CFW小鼠，然后腹腔注射LZ—8 6.9mg/kg或7.4mg/kg，每周二次，第17d小鼠靜脈注射BSA進(jìn)行攻擊，結(jié)果對(duì)照組小鼠全部出現(xiàn)速發(fā)型過敏反應(yīng)癥狀，少數(shù)死亡。而LZ—8組無一出現(xiàn)。在第17d與BSA攻擊同時(shí)靜脈注射LZ—8，小鼠仍出現(xiàn)速發(fā)型過敏反應(yīng)，表明LZ—8預(yù)防但不能治療速發(fā)型過敏反應(yīng)。預(yù)防給予LZ—8還可抑制由BSA致敏而引起的A rthus反應(yīng)。
Kohda等（1985）報(bào)告，從赤芝中提出的ganoderic C1和C2（0.4μg/ml）對(duì)肥大細(xì)胞釋放組織胺有抑制作用。Tasaka等（1988）從靈芝發(fā)酵液中提取到棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸，其中油酸具有膜穩(wěn)定作用，可抑制組織胺釋放和45Ca攝取。隨后他們又從赤芝培養(yǎng)物中分離出一種環(huán)八硫（cyclooctasulfur)，可抑制大鼠腹腔肥大細(xì)胞釋放組織胺，并阻止肥大細(xì)胞攝取45Ca，但對(duì)細(xì)胞內(nèi)cAMP無影響。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)八硫可誘導(dǎo)肥大細(xì)胞膜上蛋白結(jié)合位點(diǎn)的變化，提示環(huán)八硫與膜蛋白質(zhì)相互作用，從而抑制45Ca的攝取。這可能是其抑制組織胺釋放的主要原因。
從以上研究結(jié)果可見，靈芝的抗過敏作用的有效成分較為復(fù)雜，非單一成分可闡述清楚，值得深入研究。
第三節(jié) 抗放射作用
我們發(fā)現(xiàn)，在60Coγ射線照射前給小鼠灌胃靈芝液（10g/kg）20d，照射后繼續(xù)給藥2周，能顯著降低動(dòng)物的死亡率。靈芝組和對(duì)照組照射后30d的死亡率分別為44.4%和70.4%。60Coγ射線照射后，給小鼠腹腔注射靈芝液（10g/kg）雖對(duì)照射后30d死亡率無影響，但可使死亡動(dòng)物的平均存活時(shí)間明顯延長。
臺(tái)灣學(xué)者Hsu等（1990）亦證明，赤芝提取物腹腔注射對(duì)小鼠經(jīng)X線照射所致?lián)p傷具有一定的保護(hù)作用，可輕度增加照射30d的存活率，促進(jìn)照射后小鼠體重和血像的恢復(fù)。
我們?cè)茰y(cè)靈芝對(duì)放射性損傷的保護(hù)作用可能與其刺激骨髓造血機(jī)能有關(guān)。關(guān)洪昌等（1981）的研究證實(shí)了這種推測(cè)。每日給小鼠腹腔注射靈芝多糖D6（74mg/kg），7d后可使3H-亮氨酸、3H-胸腺嘧啶核苷和3H-尿嘧啶核苷分別參入骨髓細(xì)胞蛋白質(zhì)、DNA和RNA的參入量較對(duì)照組增加28.5%、43.3%和45.7%，說明靈芝多糖能促進(jìn)骨髓細(xì)胞蛋白質(zhì)、核酸的合成，加速骨髓細(xì)胞的分裂增殖。
第四節(jié) 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用
一、鎮(zhèn)靜作用
我們?cè)C明，給小鼠腹腔注射靈芝酊（5 g/kg）、靈芝發(fā)酵濃縮液（10ml/kg）或菌絲液（5g/kg）后，經(jīng)1～2min，即出現(xiàn)鎮(zhèn)靜作用，表現(xiàn)為自發(fā)活動(dòng)明顯減少，肌張力降低。河北新醫(yī)大學(xué)老年慢性氣管炎研究組亦報(bào)告，腹腔注射靈芝恒溫滲濾液（5～10g/kg）能抑制小鼠自發(fā)性活動(dòng)，具有明顯的鎮(zhèn)靜作用。四川醫(yī)學(xué)院報(bào)道，給小鼠灌胃靈芝濃縮液20ml/kg或腹腔注射靈芝液3ml/kg，均可抑制小鼠自發(fā)性活動(dòng)，作用可持續(xù)3～6h。轉(zhuǎn)籠試驗(yàn)還指出，靈芝濃縮液在鎮(zhèn)靜作用時(shí)，還減弱小鼠攀附能力，肌肉輕度松弛。其鎮(zhèn)靜作用隨劑量加大而增強(qiáng)。
此外，一系列研究報(bào)告指出，給小鼠注射靈芝液（20g/kg）能顯著增強(qiáng)戊巴比妥鈉的麻醉作用的半數(shù)有效量（ED50）。靈芝恒溫滲濾液能顯著延長環(huán)已巴比妥鈉的作用時(shí)間。給小鼠灌胃靈芝濃縮液20ml/kg，能顯著增強(qiáng)戊巴比妥鈉的催眠作用。薄蓋靈芝發(fā)酵液腹腔注射亦可使小鼠自發(fā)性活動(dòng)減少，并可加強(qiáng)氯丙嗪、利血平的鎮(zhèn)靜作用，拮抗苯丙胺的興奮作用。
這些結(jié)果均指出，靈芝及其提取物具有鎮(zhèn)靜催眠作用。
二、安定作用
西安醫(yī)學(xué)院藥理教研組曾報(bào)告，給小鼠皮下注射靈芝注射液（10g/kg）能刺激電刺激引起的撕咬反應(yīng)。江西醫(yī)學(xué)院藥理教研組等亦發(fā)現(xiàn)，腹腔注射靈芝發(fā)酵總堿（1.32g/kg）及發(fā)酵浸膏（1.4g/kg）均能顯著抑制孤獨(dú)雄性小鼠的攻擊行為，此作用能維持4h以上。這些結(jié)果指出，靈芝能減輕動(dòng)物的攻擊行為。
三、鎮(zhèn)痛作用
用熱板法測(cè)定小鼠疼痛反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)靈芝恒溫滲濾液腹腔注射（10～15g/kg）有鎮(zhèn)痛作用。用電刺激法及熱板法進(jìn)行試驗(yàn)，給小鼠灌胃靈芝濃縮液20ml/kg或腹腔注射2ml/kg后，痛閾均有提高。用輻射熱法測(cè)定大鼠的痛反應(yīng)，腹腔注射G.sp.發(fā)酵液5ml/kg能顯著延長痛反應(yīng)潛伏期，并使近半數(shù)動(dòng)物完全鎮(zhèn)痛。
第五節(jié) 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用
一、強(qiáng)心作用
靈芝和G.sp.均有明顯的強(qiáng)心作用。我們?cè)l(fā)現(xiàn)靈芝酊對(duì)正常八木氏離體蟾蜍心臟和戊巴比妥鈉中毒的離體蟾蜍心臟均有明顯的強(qiáng)心作用，對(duì)后者作用尤為顯著，在一定劑量范圍內(nèi)，強(qiáng)心作用隨劑量增加而增強(qiáng)。靈芝菌絲體乙醇提取液及發(fā)酵濃縮液和G.sp.發(fā)酵液亦有類似的強(qiáng)心作用。但后二者往往先有短暫的抑制作用，然后表現(xiàn)出持久的強(qiáng)心作用，當(dāng)劑量加大3～5倍時(shí)，可使離體蟾蜍心臟中毒，呈現(xiàn)抑制。靈芝發(fā)酵濃縮液和G.sp.發(fā)酵液對(duì)心臟的抑制性影響可能是其中所含培養(yǎng)基的離子成分所致。
腹腔注射靈芝酊或菌絲體乙醇提取液（3g/kg）對(duì)在位兔心有明顯的強(qiáng)心作用，給藥后心收縮力分別增加41.1%和42.7%，對(duì)心率無明顯影響。靈芝子實(shí)體注射液靜脈注射也有類似強(qiáng)心作用。麻醉貓靜脈滴注靈芝熱醇提取液（50%～100%，24～44ml），亦見強(qiáng)心作用，使心收縮幅度增加30%～50%，同時(shí)使心率減慢。濃度較高時(shí)，在強(qiáng)心作用前先有短暫的抑制。大劑量中毒時(shí)，出現(xiàn)房室傳導(dǎo)阻滯。
個(gè)別相反的報(bào)告指出，靈芝恒溫滲濾液對(duì)離體蟾蜍心臟呈現(xiàn)抑制作用，對(duì)在位兔心也有短暫抑制作用。這種迥然不同的結(jié)果可能與制劑方法或?qū)嶒?yàn)條件不同有關(guān)。
二、對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用
我們?cè)l(fā)現(xiàn)，預(yù)先靜脈注射靈芝液（3g/kg），對(duì)給正常清醒家兔靜脈注射腦垂體后葉素引起的急性心肌缺血有一定的保護(hù)作用，能使心電圖（V5導(dǎo)聯(lián)）高聳的T波顯著降低。在用大白鼠進(jìn)行的類似研究中，靈芝子實(shí)體注射液亦有類似的作用。靈芝的這一作用可能與其能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈流量有關(guān)。
陳奇等（1979）報(bào)告，靜脈注射發(fā)酵靈芝總堿0.0575g/kg(相當(dāng)于12.5g生藥/kg)能使麻醉犬冠狀動(dòng)脈流量增加62%，作用持續(xù)15min以上。同時(shí)能明顯降低冠脈阻力、動(dòng)脈靜脈氧差、心肌耗氧量和心肌氧利用率，改善缺血心肌的心電圖變化。靜脈注射同樣劑量的發(fā)酵靈芝總堿還使貓冠脈流量和腦血流量分別增加45.7%和24.8%，表明靈芝不僅增加心肌供血，還能增加腦的供血。結(jié)扎豚鼠的冠狀動(dòng)脈左旋支可誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗死，心電圖呈現(xiàn)S-T段明顯抬高，T波倒置等異常變化。靜脈注射發(fā)酵靈芝總堿（相當(dāng)于40g生藥/kg）后，抬高的ST段明顯下降而接近正常，倒置的T波立即減輕其倒置的深度，心率明顯減慢。靈芝對(duì)急性實(shí)驗(yàn)性心肌梗死的治療作用除與其降低心肌耗氧量有關(guān)外，還可能與其擴(kuò)張冠脈的側(cè)支，因而增加缺血區(qū)心肌的供血和供氧有關(guān)。
靈芝發(fā)酵液的氨水洗脫部分能使離體豚鼠冠脈流量從14.4ml/min，增至30ml/min。靜脈注射此部分（4ml/kg）可顯著對(duì)抗腦垂體后葉素引起的家兔急性心肌缺血。野生紫芝總提取物亦能使離體豚鼠心臟的冠脈流量增加105%，心率略減慢。
為了進(jìn)一步闡明靈芝對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用，我們用同位素銣86（86Rb）示蹤法測(cè)定小鼠心肌營養(yǎng)性血流量（毛細(xì)血流量），并觀察靈芝制劑對(duì)它的影響。此法中，心肌攝取86Rb的能力與心肌營養(yǎng)血流量成正比，即心肌開放的毛細(xì)血管數(shù)量越多，心肌細(xì)胞膜及毛細(xì)血管的通透性越大，86Rb的攝取量越多。結(jié)果發(fā)現(xiàn)腹腔注射靈芝液、菌絲體乙醇提取液和G.sp.發(fā)酵液均能顯著增加小鼠肌攝取86Rb的能力，且此作用隨所用靈芝制劑的劑量增加而增強(qiáng)，表明它們均能增加小鼠心肌營養(yǎng)性血流量（表7-10）。野生紫芝的酒劑、酒水制劑及人工培養(yǎng)紫芝酒劑亦有類似的增加心肌營養(yǎng)性血流量作用，且以后者作用最強(qiáng)。以上結(jié)果顯示，靈芝能增加心肌營養(yǎng)性血流量，改善心肌微循環(huán)，增加心肌供氧，這可能是它對(duì)心肌缺血保護(hù)作用的重要環(huán)節(jié)。
表7-10 靈芝對(duì)小鼠心肌攝取86Rb的影響
藥物
劑量
(g/kg,ip)
鼠數(shù)
心肌攝取86Rb占注入量%
增加%
對(duì)照
-
13
0.81±0.02
-
靈芝液
20
13
1.00±0.09*
23.45
靈芝液
30
11
1.11±0.07***
36.87
對(duì)照
-
9
0.81±0.03
-
菌絲液
10
7
1.07±0.01**
32.09
菌絲液
15
10
1.12±0.03**
38.59
對(duì)照
-
12
1.14±0.16
G.SP.發(fā)酵液
5△
10
1.31±0.17
14.9
G.SP.發(fā)酵液
10△
12
1.47±0.09*
31.26
x - ±s,*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001與對(duì)照組比較�！鱩l/kg,ip。
三、降壓作用
我們?cè)C明，給麻醉貓靜脈注射靈芝液0.5～4.0g/kg均可使血壓立即下降。以劑量為1.0 g/kg的7次給藥結(jié)果計(jì)算，平均降壓數(shù)值為68.1kPa(49mmHg)但作用僅維持0.5～2min，血壓旋即恢復(fù)正常。給麻醉家兔靜脈注射靈芝發(fā)酵液亦見類似現(xiàn)象。
Kabir等（1988）用自發(fā)性高血壓大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，給藥組在飼料中加入5%靈芝菌絲體粉，對(duì)照組不加，四周后可見，給藥組血壓較對(duì)照組明顯降低，血漿及肝臟中的膽固醇含量亦下降。
Lee等（1990）報(bào)告，靈芝菌絲水提物靜脈注射給藥可使家兔和大鼠的收縮壓和舒張壓均降低，但對(duì)心率無影響，并證明這種降壓作用是通過抑制中樞交感神經(jīng)而實(shí)現(xiàn)。
Morigwa等（1986）從靈芝的70%甲醇提取物中獲得5個(gè)三萜類化合物ganoderic acid K,S,ganoderal, ganoderol A B對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme)均具抑制作用，這亦可能與靈芝的降壓作用有關(guān)。
四、抑制實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及降血脂作用
家兔飼以高膽固醇高脂肪飲食，在主動(dòng)脈壁可形成實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，并使血清膽固醇、甘油三酯和β脂蛋白明顯升高。長期給家兔口服靈芝濃縮液或糖漿可使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成緩慢且輕，但對(duì)血清脂質(zhì)變化無影響。
Shiao等（1986）在大鼠的飼料中加入靈芝的菌絲體，可顯著降低血清和肝臟中膽固醇和甘油三酯的含量，并指出其有效成分是三萜類，主要是ganodermic acid（III型化合物）。Komoda等（1989指出，從靈芝中分離出的具有7-氧代和5-α-羥基的類固醇在濃度為18μmol/L時(shí)，可抑制（24，25-3H）24，25-雙氫羊毛甾醇合成膽固醇。
第六節(jié) 對(duì)呼吸系統(tǒng)的作用
一、鎮(zhèn)咳作用
小鼠氨水引咳法鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)，腹腔注射靈芝水提液、乙醇提取液A和恒溫滲濾液、靈芝菌絲醇提液、靈芝發(fā)酵濃縮液及G.sp.發(fā)酵液均有明顯鎮(zhèn)咳作用，使氨水刺激引咳的潛伏期延長，或使咳嗽次數(shù)顯著減少。但靈芝制劑對(duì)電刺激貓喉上神經(jīng)引起的咳嗽無鎮(zhèn)咳作用。
二、祛痰作用
用小白鼠酚紅法進(jìn)行祛痰實(shí)驗(yàn)，腹腔注射上述鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)時(shí)采用的靈芝制劑，多可使小鼠氣管沖洗液中酚紅含量增加，即有祛痰作用。但靈芝發(fā)酵濃縮液無效。由于目前對(duì)酚紅法祛痰實(shí)驗(yàn)的意義有肯定和否定兩種認(rèn)識(shí)，故對(duì)以上結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床研究進(jìn)一步探討。
三、平喘作用
我們?cè)l(fā)現(xiàn)，靈芝酊、靈芝液、靈芝菌絲體乙醇提取液及濃縮發(fā)酵液對(duì)組織胺引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮有解痙作用，且此作用與所用藥物濃度成正比。G.sp.發(fā)酵液除拮抗組織胺外，尚能拮抗乙酰膽堿和氯化鋇引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮。
將豚鼠置于噴霧箱中，噴以一定濃度的組織胺溶液，可使之產(chǎn)生“喘息”）呼吸困難、抽搐直至翻倒）。預(yù)先腹腔注射靈芝酊或靈芝液（5～10g/kg）、靈芝菌絲體乙醇提取液（3.75g/kg)及靈芝發(fā)酵濃縮液(5ml/kg)可使少數(shù)動(dòng)物不產(chǎn)生“喘息”，但可使“喘息”發(fā)作的潛伏期顯著延長。
靈芝抑制組織胺和過敏的慢反應(yīng)物質(zhì)（現(xiàn)已知為白三烯類）釋放的作用亦與其平喘作用有關(guān)。
四、對(duì)慢性氣管炎動(dòng)物的治療作用
用復(fù)方靈芝（內(nèi)含靈芝菌絲體和銀耳孢子）治療慢性氣管炎大鼠（用雜木鋸末和煙絲燃煙熏6周形成，均有典型慢性氣管炎病理改變）共4周，可見氣管的纖毛柱狀上皮的再生修復(fù)快而完全；氣管軟骨變性恢復(fù)也較快，多在給藥后1～2周恢復(fù)正常，而對(duì)照組則需4周方可完全恢復(fù)；杯狀細(xì)胞增生較對(duì)照組為輕；炎癥滲出亦較對(duì)照組消退快。
第七節(jié) 對(duì)消化系統(tǒng)的作用
一、對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性肝炎的防治作用
四氯化碳（CCl4）是一種肝臟毒物，進(jìn)入體內(nèi)可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物迅速發(fā)生中毒性肝炎，除有明顯的肝功能障礙外，并出現(xiàn)典型的中毒性肝炎的病理組織學(xué)改變。我們?cè)l(fā)現(xiàn)，連續(xù)給小鼠口服靈芝酊（10g/kg）8d，能減輕CCl4引起的病理組織學(xué)改變，并減輕CCl4對(duì)肝臟解毒功能的損害，使CCl4中毒性肝炎小鼠代謝中樞抑制藥硫噴妥鈉的能力明顯增強(qiáng)。靈芝子實(shí)體液、菌絲體液和二者合并的靈芝全草湯對(duì)小鼠CCl4中毒性肝炎亦有一定的防治作用。無論預(yù)先給藥或形成CCl4肝炎后再給藥，均能不同程度的減輕CCl4引起的肝功能損害，降低血清谷-丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT），減輕肝小葉炎癥細(xì)胞浸潤，促進(jìn)肝細(xì)胞再生。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥理室曾報(bào)道，從薄樹芝菌絲體中提出的薄醇醚可使部分切除肝臟的小鼠肝臟的再生能力加強(qiáng)，并能對(duì)抗大劑量消炎痛對(duì)小白鼠的毒性作用；從靈芝孢子全中提出的孢醚也有此作用，但較弱。劉耕陶等（1979）證明，靈芝或紫芝酒提物對(duì)CCl4肝炎小鼠的SGPT升高，均有明顯降低作用。靈芝酒提物還使CCl4肝炎動(dòng)物升高的肝臟甘油三酯含量降低。靈芝和紫芝都能使灌胃給予d1-乙硫氨酸小鼠肝臟甘油三酯含量較對(duì)照組明顯降低，前者的作用似較后者稍強(qiáng)。靈芝和紫芝酒提物還能明顯促使部分切除肝臟的小鼠肝臟再生，并明顯降低洋地黃毒甙或消炎痛中毒小鼠的死亡率。上述結(jié)果證明，靈芝和紫芝確有保肝作用，它們可減輕化學(xué)藥物（毒物）對(duì)肝臟的損傷，加強(qiáng)肝臟代謝藥物（毒物）的解毒功能。
關(guān)洪昌和叢錚（1981）進(jìn)一步研究了靈芝多糖D6對(duì)小鼠蛋白質(zhì)、核酸合成和肝勻漿細(xì)胞色素P-450含量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)靈芝多糖D6（74mg/kg每日腹腔注射一次，共7d）能促進(jìn)3H-亮氨酸（3H-Leu）參入小鼠血清蛋白質(zhì)和肝臟蛋白質(zhì)，還能促進(jìn)3H-尿嘧啶核苷（3H-UR）參入肝臟RNA，但對(duì)3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）參入肝臟DNA無明顯影響（表7-11）。靈芝多糖還能增加小鼠肝勻漿細(xì)胞色素P-450含量（表7-12）。這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步闡述了靈芝保肝解毒作用的機(jī)制。
表7-11 靈芝多糖D6對(duì)[3H]Leu、[3H]TdR和 [3H]UR
參入小鼠肝臟蛋白質(zhì)、DNA和RNA的影響
[3H]標(biāo)高前體
cpm/100mg肝重
增加%
對(duì)照組
D6組
[3H]Leu
9916±299（7）
11290±389*（7）
13.9
[3H]TdR
6975±528（8）
7121±307（8）
2.1
[3H]UR
6737±189（8）
8120±320**（8）
20.5
x - ±s；靈芝多糖D674mg/kg×7d，ip； 括號(hào)內(nèi)數(shù)字為動(dòng)物數(shù)；*P<0.05，**P<0.01與對(duì)照比較。
表7-12 靈芝多糖D6對(duì)小鼠肝勻漿細(xì)胞色素P-450含量的影響
組別
鼠數(shù)
劑量
(mg/kg, ip)
細(xì)胞色素P-450含量
（nmol/g肝重）
增加%
對(duì)照
14
-
35.15±1.06
-
D6
16
74
42.06±1.31**
19.7
x - ±s； **P<0.01與對(duì)照比較。
張正等（1989）觀察了20種真菌對(duì)乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用。采用體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定藥物對(duì)乙肝病毒DNA聚合酶（HBV-DNAP）的抑制作用和減少HBV-DNA拷貝作用，采用PLC/PRF/5細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，并在鴨肝炎模型上觀察藥物的整體抗病毒療效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靈芝類真菌在體外對(duì)HBV-DNAP的抑制率分別為：樹舌>80%，黑靈芝60%～70%，薄樹芝50%～60%。HBV-DNA拷貝減少結(jié)果分別為：樹舌40.6%，黑靈芝28.1%。樹舌（10mg/ml）抑制PLC/PRF/5細(xì)胞分泌乙肝表面抗原（HBsAg）的抑制率為59.7%。這些結(jié)果表明，樹舌等在體外能抑制HBV。整體給藥實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，每日口服樹舌（50mg/kg）2次，連續(xù)用藥10d能降低感染鴨乙肝毒（DHBV）的幼鴨的DDNAp和DDNA作用，表明樹舌對(duì)體內(nèi)的DHBV有抑制作用（表7-13）。這些結(jié)果為將靈芝用于防治病毒性肝炎提供了根據(jù)。
表7-13 樹舌對(duì)感染鴨乙肝病毒（DHBV）幼鴨的DDNAP和DDNA的影響
藥物
感染前
感染后給藥前
給藥后
停紅后3d
DDNAP
DDNA
DDNAP
DDNA
5d
10d
DDNAP
DDNA
DDNAP
DDNA
DDNAP
DDNA
對(duì)照
350±18
0
1247±135
105
776±56
150
698±75
105
726±62
120
樹舌
331±31
0
1564±145
100
597±68
80
591±130
35
728±91
105
注：DDNAP以cpm表示，DDNA以Pg表示。
二、對(duì)腸平滑肌的作用
在離體兔腸實(shí)驗(yàn)，靈芝恒溫滲濾液濃度為0.016%～0.5%時(shí)，能興奮兔腸，隨著藥液濃度增高，腸管緊張度增加，而收縮幅度減��；當(dāng)藥物濃度達(dá)1%時(shí)，有些標(biāo)本呈現(xiàn)抑制；藥物濃度為2%時(shí)，全部標(biāo)本均表現(xiàn)張力降低，隨后麻痹。于在體兔腸實(shí)驗(yàn)，靈芝恒溫滲濾液（0.0625～1.0g/kg靜脈注射）能興奮腸管活動(dòng)。
離體動(dòng)物腸實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，靈芝酊及其水溶液（均為1.25×10-2g/ml)對(duì)離體兔小腸和離體豚鼠腸呈現(xiàn)抑制作用。靈芝酊的抑制作用強(qiáng)于其水溶液的作用。靈芝酊及水溶液還能拮抗乙酰膽堿對(duì)腸平滑肌的興奮作用。
還有報(bào)告指出，靈芝菌絲的乙醇抽提物能拮抗組織胺對(duì)離體豚鼠腸的興奮作用。
第八節(jié) 對(duì)內(nèi)分泌和代謝系統(tǒng)的作用
一、對(duì)腎上腺皮質(zhì)機(jī)能的影響
給小鼠長期大量注射氫化可的松后，突然停藥可引起“耗竭”現(xiàn)象，表現(xiàn)為體重減輕、毛發(fā)松散無光澤，耐寒能力降低及腎上腺重量明顯減輕等。預(yù)先給小鼠灌胃靈芝液（10g/kg）2周，并不能對(duì)抗氫化可的松停用引起的“耗竭”現(xiàn)象。相反，靈芝液加氫化可的松組的“耗竭”現(xiàn)象似較單用氫化可的松組更明顯。但由于統(tǒng)計(jì)學(xué)處理二組間的差異無顯著性，故尚難說靈芝液能增強(qiáng)氫化可的松的作用。但本研究結(jié)果似表明靈芝無促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）樣作用。這與長期給予靈芝對(duì)幼年在鼠胸腺重量無明顯影響，也與靈芝不能改變大鼠和小鼠皮膚上腺維生素C和膽固醇含量相一致。
在摘除雙側(cè)皮膚上腺的大白鼠給予復(fù)方靈芝（靈芝菌絲加銀耳孢子）共4周，結(jié)果其自發(fā)性氣管炎及間質(zhì)性肺炎的發(fā)病率均低于未給藥的摘除雙側(cè)腎上腺的對(duì)照組。此結(jié)果似又指出，復(fù)方靈芝可能有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。
二、對(duì)性腺機(jī)能的影響
大鼠灌胃給予靈芝水提液（10g/kg）共8d，對(duì)切除卵巢雌大鼠性周期無影響，陰道涂片檢查為陰性。對(duì)去勢(shì)雄大鼠此劑量也不能增加精囊腺、提肛肌-海綿球肌的重量�？梢婌`芝水提液無雌激素或雄激素樣作用。
三、降血糖作用
Kimura等（1988）報(bào)告，灌胃給予靈芝子實(shí)體水提物，降低葡萄糖負(fù)荷大鼠的血糖水平。Kikino等（1989）研究了靈芝降血糖的有效成分，發(fā)現(xiàn)從靈芝子實(shí)體中提取的多糖ganoderan A, B, C具有降血糖作用。它們是肽多糖或不含肽多糖，分子量范圍7 400～20 000�，F(xiàn)已證明，肽多糖ganoderan B能提高正常小鼠和糖負(fù)荷小鼠血漿胰島素水平，但對(duì)胰島素與脂肪細(xì)胞的結(jié)合過程無影響。ganoderan B可明顯促進(jìn)肝臟葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸和糖原合成酶活性，降低肝臟葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性。在對(duì)血漿總膽固醇和甘油三脂水平無影響的情況下，可降低肝糖原含量。
四、提高機(jī)體耐受急性缺氧的能力
在大量實(shí)驗(yàn)研究中，我們發(fā)現(xiàn)多次灌胃給予靈芝酊和靈芝液（均為10g/kg）及一次腹腔注射靈芝發(fā)酵液（10ml/kg）、靈芝菌絲液（5ml/kg）均能顯著提高小鼠耐受常壓缺氧的能力。一次腹腔注射靈芝液還能顯著提高預(yù)先皮下注射異丙腎上腺素的小白鼠耐受急性缺氧的能力，這表明在組織耗氧量增加，對(duì)缺氧耐受力降低的情況下，靈芝仍能提高機(jī)體對(duì)缺氧的耐受能力�？诜蚋骨蛔⑸潇`芝濃縮液還明顯增強(qiáng)小鼠耐受低氣壓-76.45～-77.84kPa(-550～-560mmHg)缺氧的能力。
靈芝抗缺氧作用的有效成分尚未完全闡明，但引人注目。如湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所對(duì)從靈芝發(fā)酵液中提取出的氨洗脫液的抗缺氧作用進(jìn)行了深入不敷出的研究。他們發(fā)現(xiàn)：腹腔注射靈芝氨洗脫液10ml/kg（約1/20LD50）能提高小鼠抗低壓艙（相當(dāng)11000m高度）缺氧耐力30%以上，還顯著提高小鼠抗窒息性缺氧的耐力，使動(dòng)物平均存活時(shí)間延長20min左右。在此劑量條件下，靈芝氨洗脫液還明顯降低小鼠的耗氧量和死亡率。腹腔注射靈芝氨洗脫液20ml/kg還可以使在低壓艙缺氧狀態(tài)下（相當(dāng)于9500m高空）的大鼠心肌ATP含量較對(duì)照組增加61.9%。此結(jié)果指出，靈芝氨洗脫液部分是靈芝發(fā)酵液提高小鼠耐受缺氧能力的有效成分。腹腔注射發(fā)酵靈芝總堿（相當(dāng)于0.23g生藥/kg)能顯著提高小鼠耐受低氣壓缺氧和常壓缺氧的能力，并明顯降低小鼠整體耗氧量。野生紫芝總提取物或醇提取物也有類似抗缺氧作用。
靈芝提高機(jī)體耐受急性缺氧能力的機(jī)制尚不清。在初步實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)靈芝能抑制小白鼠甲狀腺攝取131I。河北新醫(yī)大藥治教研組曾報(bào)告：給大鼠灌胃靈芝水提液（10g/kg），對(duì)大鼠肝、腎、睪丸及卵巢的耗氧量無明顯影響。北京醫(yī)科大學(xué)生化教研室的管內(nèi)試驗(yàn)證明，當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中靈芝液的終濃度為2.5%時(shí)，能顯著增加小鼠心肌勻漿耗氧量，而反應(yīng)系統(tǒng)中終濃度為0.5%時(shí)，靈芝液對(duì)心肌勻漿耗氧量無明顯影響。
陳文為等（1983）報(bào)告，靈芝液能增加健康人工紅細(xì)胞（離體）和大鼠紅細(xì)胞（整體）中2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）含量，并證實(shí)靈芝的這一作用與其中含有的腺苷有密切關(guān)系。已知2，3-DPG是人類和哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞內(nèi)糖酵解旁路的中間代謝物，是調(diào)節(jié)血紅蛋白與氧親合力的主要小分子物質(zhì)。其含量增高，使氧合血紅蛋白解離曲線右移，有利于外周毛細(xì)胞 血管中氧合血紅蛋白釋放更多的氧，供組織細(xì)胞需氧代謝消耗。在病理?xiàng)l件下，也是機(jī)體缺氧缺血的重要代償因素之一。靈芝的這一作用有助于組織獲得較多氧，增加機(jī)體的抗病能力 。
五、清除自由基作用
自由基是細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)生的活性物質(zhì)，它能誘導(dǎo)氧化反應(yīng)，使生物膜中多種不飽和脂類發(fā)生超氧化變性，形成脂質(zhì)過氧化物引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，導(dǎo)致器官組織的損傷。一些初步研究指出，靈芝熱水提取物、靈芝多糖均具有清除自由基活性，如清除氧自由基（O2-）和羥自由基（·OH）。根據(jù)衰老的自由基產(chǎn)生學(xué)說，認(rèn)為自由基的增多功能衰老的重要原因，故靈芝的清除自由基作用可能亦參與其抗衰老作用。
第九節(jié) 其他作用
劉耕陶等報(bào)告，除草劑2，4-二氯苯氧乙酸（簡稱2，4-D）能引起小鼠血清醛縮酶顯著升高，并伴隨有受刺激出現(xiàn)角弓反張狀態(tài)的肌強(qiáng)直反應(yīng)。在注射2，4-D前后，給小鼠腹腔注射從薄蓋靈芝菌絲體中提出的薄醇水（20g/kg）和靈芝子實(shí)體水制劑（30g/kg）各一次，均能使升高的血清醛縮酶明顯降低。從薄蓋靈芝菌絲體提取物中分離出的尿嘧啶和尿嘧啶核苷亦有降低血清醛縮酶的作用，表明此二進(jìn)制成分是薄蓋靈芝菌絲體降低血清醛縮酶的兩種有效成分。體外實(shí)驗(yàn)還證明，尿嘧啶核苷對(duì)血清醛縮酶活性并無直接抑制作用。故靈芝及其有效成分降低血清醛縮酶作用并非由于直接抑制了該酶的活性，可能是對(duì)2，4-D所致肌肉損傷有某種保護(hù)作用。
彭華民等用電鏡進(jìn)行的超微結(jié)構(gòu)研究證明，用靈芝浸膏治療燒傷大鼠，可使燒傷大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)保持得比較完整，結(jié)構(gòu)比較清晰，線粒體無明顯腫脹，其嵴排列較整齊，線粒體保持較完整。
給大鼠腹腔注射靈芝子實(shí)體總提取物12mg/（100g.d)共14d，可使心肌組織和血漿中的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平升高。
在內(nèi)毒素誘發(fā)的播散性血管內(nèi)凝血大鼠，給予靈芝水提物能防止血小板和纖維蛋白原的減少，延長前凝血酶原時(shí)間，增加纖維蛋白降解產(chǎn)物，防止肝靜脈血栓形成。體外實(shí)驗(yàn)證明，靈芝水提液可抑制膠原酶誘發(fā)的血小板聚集反應(yīng)。
最近韓國的Kim等報(bào)告了靈芝抗人類免疫缺陷病毒（HIV）的作用。試驗(yàn)用的靈芝子實(shí)體水提取液分為高、低分子量兩部分。水提取后的子實(shí)體再經(jīng)甲醇提取，提取物依其電荷分為8個(gè)部分。取上述提取物對(duì)人T淋巴母細(xì)胞（CEMIW）進(jìn)行XTT抗病毒試驗(yàn)，觀察上述靈芝提取物對(duì)未受病毒感染細(xì)胞的50%抑制濃度（IC50），對(duì)受病毒感染細(xì)胞的50%有效保護(hù)濃度（EC50）及體外治療指數(shù)（TI，IC50/EC50）。此外，還觀察提取物對(duì)HIV-1（HXBC2病毒毒株）感染的Jurkat T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中病毒逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靈芝子實(shí)體水提取液的高分子量部分（GK-HMW）即無細(xì)胞毒性，亦無抗HIV活性。低分子量部分對(duì)靶細(xì)胞無毒性，但對(duì)病毒增生有很強(qiáng)抑制作用，其IC50為125μg/ml，EC50為11.0～11.2μg/ml, TI值為11.1～11.3。甲醇粗提取物（GLA）、正己烷層（GLB）和乙酸乙酯層（GLC）的IC50分別為43.6～44.4μg/ml、21.5～22.4μg/ml和27.1～29.3μg/ml，EC50分別為14.4～43.6μg/ml、15.2～21.5μg/ml和27.1～29.3μg/ml。中性部分（GLE）和堿性部分（GLG）的IC50分別為14.8～15.0μg/ml和22.4～24.6μg/ml，EC50分別為14.8～15.0μg/ml和22.4～24.6μg/ml。表明這些部分的細(xì)胞毒性和抗HIV活性均較強(qiáng)。水可溶部分（GLD）、酸性部分（GLF）和兩性部分（GLH）均既無細(xì)胞毒性，也無抗HIV活性。在對(duì)病毒逆轉(zhuǎn)錄酶活性的測(cè)試中，GLC和GLG均具有明顯抗HIV作用。GLC（50μg/ml）與Jurkat T細(xì)胞共同培養(yǎng)3d后，可抑制病毒增生達(dá)75%，GLG（100μg/ml）亦可抑制病毒增生達(dá)66%，這些結(jié)果與XTT試驗(yàn)結(jié)果一致。這些結(jié)果表明靈芝子實(shí)體水提取物的低分子量部分、甲醇提取物的中性和堿性部分能抑制HIV增殖（‘96國際靈芝研討會(huì)特別演講，臺(tái)北，1996）。
第十節(jié) 毒性試驗(yàn)
動(dòng)物的急性及亞急性實(shí)驗(yàn)均證明，靈芝的毒性極低，與中醫(yī)古籍記載的靈芝“溫平無毒”一致。
表7-14列出靈芝制劑對(duì)小白鼠半數(shù)致死量（LD50）。
在亞急性毒性實(shí)驗(yàn)中，給幼大鼠灌胃飼以靈芝冷醇提取液（1.2及12g/kg）共30d，結(jié)果對(duì)生長發(fā)育無不良影響。肝功能、心電圖等未見明顯異常，心、肝、腎、肺、脾、腦及腸等臟器的病理組織學(xué)檢查亦未見明顯異常。每日給狗灌胃靈芝冷醇提取液（12g/kg）共15d，然后再給靈芝熱醇提取液（24g/kg）共13d，前后共給藥28d，觀察指標(biāo)均同大鼠亞急性毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果也基本相止同。
靈芝糖漿對(duì)小白鼠、兔及狗的亞急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦指出，靈芝的毒性低，大劑量服藥10～20d，對(duì)動(dòng)物的食欲、體重、肝腎功能及血像均無不良影響。心、肺、肝、腎等重要臟器無明顯病理改變。
表7-14 靈芝制劑對(duì)小鼠的半數(shù)致死（LD50）
制劑
給藥方式
LD50
備注
靈芝發(fā)酵濃縮液
灌胃
27.57ml/kg
含發(fā)酵液及菌絲
乙醇提取液
靈芝發(fā)酵濃縮液
腹腔注射
4.89ml/kg
1∶1濃縮29倍
靈芝發(fā)酵濃縮液
腹腔注射
(15.17±0.79)ml/kg
濃縮8.3
靈芝恒溫滲濾液
腹腔注射
(38.30±1.04)g/kg
靈芝（子實(shí)體）液
腹腔注射
(38.10±0.18)g/kg
靈芝（菌絲體）液
腹腔注射
(34.20±0.11)g/kg
靈芝熱醇提取液
腹腔注射
6.75g/kg
靈芝濾液濃縮注射液
靜脈注射
10.91ml/kg
濃縮15倍
靈芝菌絲醇提注射液
靜脈注射
12.89ml/kg
靈芝菌絲水提注射液
靜脈注射
29.40ml/kg
密紋薄芝發(fā)酵液
腹腔注射
22.46±1.27ml/kg
濃縮8.5倍
特殊毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果指出，靈芝菌絲體對(duì)鼠沙門桿菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102菌株無論加或不加S9，其回復(fù)突變菌落數(shù)均與陰性對(duì)照組相似。給小鼠灌胃靈芝菌絲體（18g/kg）共7d，對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變率和微核千分率均無異常影響，對(duì)小鼠精子畸變率亦無異常影響。即靈芝菌絲體無致突變作用。
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