| 靈芝對白介素-1（IL-1）產(chǎn)生的影響 |
| 【 整理發(fā)布：王力野生靈芝網(wǎng) 】 【 發(fā)布日期：7/6/2011 】 瀏覽次數(shù):1886 |
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文報告日本產(chǎn)靈芝對小鼠腹腔巨噬細胞及大鼠肝臟枯否細胞產(chǎn)生IL-1的影響。用BALB/c小鼠胸腺細胞增殖檢測IL-1活力。結(jié)果顯示：在試管內(nèi)，靈芝500μg/ml可以促進Lps（10μg/ml）活化的巨噬細胞產(chǎn)生IL-1�？诜`芝整體試驗（125、250、500mg/kg）qd.×10同樣促進Lps（10μg/ml）活化的巨噬細胞產(chǎn)生IL-1；并與劑量正相關(guān)。但無論試管內(nèi)還是整體，靈芝單獨應(yīng)用對巨噬細胞產(chǎn)生IL-1均有抑制作用。靈芝對枯否細胞產(chǎn)生IL-1未顯示明顯影響。
關(guān)鍵詞 靈芝；白介素-1（IL-1）；巨噬細胞；枯否細胞
靈芝（Ling Zhi, LZ, Ganoderma Lucidum）作為一種傳統(tǒng)中藥已有2000多年的歷史。為進一步探討靈芝的藥理作用機制，本室對日本和漢生藥研究所人工培植靈芝的熱水浸出物進行了多指標(biāo)的免疫藥理研究。業(yè)已證實靈芝對多種免疫功能有調(diào)節(jié)作用，且在各種病理模型，如Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ變態(tài)反應(yīng)、同種異位心肌移植時的排斥現(xiàn)象等顯示明顯抑制作用。IL-1是調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答的細胞因子之一，還參與某些疾病的病理過程，其重要性日益為人們注意。靈芝對IL-1產(chǎn)生的影響尚未見有報道。本實驗就是通過觀察靈芝對小鼠腹腔巨噬細胞及大鼠肝臟枯否細胞產(chǎn)生IL-1的影響，為解釋其臨床作用提供理論依據(jù)。
材料與方法
動物
昆明種小鼠，18～22g， ♂； Wistar大鼠，170～250g，♂。BALB/c小鼠，6～7周齡，雌雄兼用，以上動物均由上海醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供。
試劑
RPMI-1640培養(yǎng)液，GIBCO產(chǎn)品，含丙酮酸鈉1μmol, Hepes 15mmol,小牛血清10%，2-巰基乙醇5×10-5mol。脂多糖（Lipopolysaccharide, Lps)，刀豆蛋白A(Concanavalin A, Con A)，I型膠原酶（Collagenase I），鏈霉蛋白酶（Pronase E）均為Sigma產(chǎn)品。3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）為中科院上海原子核研究所產(chǎn)品，比活度1110GBq/mmol。
靈芝混懸液：靈芝于0.2%CMC充分研磨后，置80℃水浴振蕩4h，用于整體給藥。靈芝水溶部分：靈芝溶于生理鹽水中，80℃水浴振蕩2h，離心1500rpm，10min，收集上清。靈芝凍融部分：靈芝溶于生理鹽水，80℃水浴振蕩2h，-30℃冷凍1h，迅速融化，反復(fù)3次，離心取上清。后兩部分溶液均用于離體試驗。
腹腔巨噬細胞產(chǎn)生IL-1的誘導(dǎo)
小鼠脫頸椎處死，RPMI-1640培養(yǎng)液沖洗腹腔并收集腹腔巨噬細胞，離心1600rpm，10min，洗2次，計數(shù)。以含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)細胞濃度至2×106/ml，于24孔培養(yǎng)板中加細胞1ml/孔，37℃，5%CO2培養(yǎng)2h后，洗去非粘附細胞。粘附細胞加或不加Lps（10μg/ml）及靈芝（1～500μg/ml），繼續(xù)培養(yǎng)24h，離心1600rpm，10min，收集上清，4℃保存，待測。
枯否細胞產(chǎn)生IL-1的誘導(dǎo)
大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，無菌條件下打開腹腔，門靜脈插管（1.5mm）。下腔靜脈在腎靜脈水平切斷，用磷酸生理鹽水緩沖液（pH7.2）以40～50ml/min的速度灌流肝臟。灌流液從下腔靜脈自然流出，灌流1min沖洗肝內(nèi)血液。結(jié)扎下腔靜脈，打開下腔靜脈，打開胸腔，經(jīng)右心房進行上腔靜脈插管，形成循環(huán)灌流。灌注0.05% I型膠原酶30min，分離肝組織，尼龍網(wǎng)過濾，得全肝細胞懸液，離心500rpm,1min,取上清加鏈霉蛋白酶（終濃度0.1%），于37℃水浴消化30min,離心3000rpm,5min,洗2次，得非肝細胞懸液，計數(shù)后調(diào)整細胞濃度為1×106/ml。于24孔培養(yǎng)板貼壁培養(yǎng)20h。去除非貼壁細胞，將貼壁細胞即枯否細胞與Lps或（和）靈芝混合培養(yǎng)24h，收集上清，測定IL-1活性。
IL-1活性的測定
BALB/c小鼠放血處死，取胸腺制備單個細胞懸液并計數(shù)。用含20%小牛血清及Con A0.625μg/ml的RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為107/ml。待測上清以1∶64稀釋。于96孔培養(yǎng)板各加100μl細胞懸液，稀釋后的待測上清及Lps(10μg/ml),總體積為0.2ml，同時設(shè)μCi/孔。用多頭細胞收集器收集細胞至醋酸纖維薄膜，液體閃爍計數(shù)儀測定每分鐘衰變數(shù)cpm，以cpm平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，t檢驗。
結(jié) 果
靈芝在試管內(nèi)對小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生IL-1的影響
靈芝水溶部分可抑制巨噬細胞分泌IL-1，但對Lps誘導(dǎo)IL-1釋放無明顯影響（表6-1）.
表6-1 靈芝水溶部分在試管內(nèi)對小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生IL-1的影響
靈芝 LPS 3H-TdR摻入量
(μg/ml) (10 μg/ml) (cpm/×106細胞)
-- -- 11163±177
1 -- 10370±400*
10 -- 10354±549
100 -- 6105±400**
500 -- 6597±1123**
-- + 11944±1632
1 + 12215±1194
10 + 10867±1217
100 + 12298±3684
500 + 14832±2143
X±SD; n=3；與對照組比較：*P<0.01, **P<0.01
靈芝凍融部分100～500μg/ml對未經(jīng)誘導(dǎo)的巨噬細胞分泌IL-1顯示抑制作用，而凍融部分500μg/ml對Lps誘導(dǎo)產(chǎn)生的IL-1有促進作用（表6-2）。
表6-2 靈芝凍溶部分在試管內(nèi)對小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生IL-1的影響
靈芝 LPS 3H-TdR摻入量
(μg/ml) (10 μg/ml) (cpm/×106細胞)
-- -- 11163±177
1 -- 12099±946
10 -- 11825±2364
100 -- 6101±1519**
500 -- 6076±262**
-- + 11944±1632
1 + 11550±1263
10 + 12867±222
100 + 9100±642
500 + 15207±1252*
X±SD; n=3；與對照組比較：*P<0.01, **P<0.01
靈芝整體給藥對小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生IL-1的影響。
靈芝使未經(jīng)激活的巨噬細胞釋放IL-1的活力降低，但對Lps激活的巨噬細胞，靈芝呈協(xié)同效應(yīng)，明顯促進IL-1的釋放，其作用與藥物劑量呈正相關(guān)。該結(jié)果與試管內(nèi)實驗結(jié)果一致（表6-3）。
表6-3 靈芝整體給藥對小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生IL-1的影響
靈芝 LPS 3H-TdR摻入量
(μg/ml) (10 μg/ml) (cpm/×106細胞)
-- -- 8125±1424
125 -- 4318±366*
250 -- 4277±673*
500 -- 5197±783*
-- + 9565±1262
125 + 10181±1259
250 + 14982±2040*
500 + 17469±3391*
口服qd.×10; X±SD; n=3；與對照組比較：*P<0.05
靈芝在試管內(nèi)對大鼠肝臟枯否細胞產(chǎn)生IL-1的影響
靈芝水溶部分無論單獨作用或與Lps合用，對枯否細胞產(chǎn)生IL-1的活力均無明顯影響（表6-4）。
表6-4 靈芝水溶部分在試管內(nèi)對小鼠肝臟枯否細胞產(chǎn)生IL-1的影響
靈芝 LPS 3H-TdR摻入量
(μg/ml) (10 μg/ml) (cpm/×106細胞)
-- -- 24726±1346
1 -- 28834±4511
10 -- 26889±7606
100 -- 23921±4419
500 -- 21819±4691
-- + 31869±622*
1 + 34299±5980
10 + 29463±6422
100 + 28560±3439
500 + 29755±2489
X±SD; n=4。與無LPS空白組比較：*P<0.05
討 論
IL-1是單核細胞分泌物具有廣泛生物學(xué)活性的一種細胞因子，能從多方面調(diào)節(jié)機體的免疫功能。推理影響IL-1產(chǎn)生或活力的物質(zhì)也將相應(yīng)地調(diào)節(jié)機體的免疫功能。靈芝對IL-1產(chǎn)生起促進作用還是抑制作用與巨噬細胞的狀態(tài)及靈芝的濃度有關(guān)。對靜止的巨噬細胞，靈芝抑制其產(chǎn)生IL-1；在刺激原存在的條件下，靈芝呈協(xié)同效應(yīng)，促進IL-1的分泌。
肝臟枯否細胞屬于機體單核-吞噬細胞系統(tǒng)。70年代以前由于分離枯否細胞比較困難，人們認(rèn)為其主要功能是吞噬隨血流進入肝臟的異物。隨著分離技術(shù)的發(fā)展，許多研究表明，枯否細胞具有參與機體免疫應(yīng)答的能力。作者發(fā)現(xiàn)在本實驗條件下，對枯否細胞產(chǎn)生IL-1，靈芝未顯示明顯作用。推測枯否細胞屬于特殊環(huán)境中高度分化的單核-吞噬細胞，其釋放細胞因子等免疫調(diào)控作用，可能與特有的微環(huán)境相關(guān)，肝臟局部的一些因素，如肝臟細胞及內(nèi)皮細胞的分泌物等對其生理效應(yīng)可能有較大的影響。
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