| 靈芝對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬及碳廓清試驗(yàn)的作用 |
| 【 整理發(fā)布：王力野生靈芝網(wǎng) 】 【 發(fā)布日期：7/6/2011 】 瀏覽次數(shù):3647 |
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本文主要觀察靈芝對(duì)巨噬細(xì)胞功能的影響。結(jié)果證明靈芝在試管內(nèi)10～50μg/ml可以刺激巨噬細(xì)胞吞噬。高濃度的靈芝凍融部分（100μg/ml）可使吞噬功能抑制。整體研究證明靈芝100～500mg/kg促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬功能。碳廓清試驗(yàn)證明口服靈芝125～625mg/kg qd.×4可以促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的功能,加速碳粒的清除。
關(guān)鍵詞 靈芝；吞噬作用；碳廓清試驗(yàn)
巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)起重要作用，激活的巨噬細(xì)胞是機(jī)體對(duì)抗外來細(xì)菌、病毒、真菌及寄生蟲的主要防御機(jī)制并已證明巨噬細(xì)胞具有抗腫瘤的作用。此外，巨噬細(xì)胞可以通過直接作用或間接通過所分泌的各種可溶性因子對(duì)免疫系統(tǒng)的啟動(dòng)及調(diào)節(jié)起關(guān)鍵性作用。
靈芝在民間被視為是一種珍貴的藥物具有延長壽命，緩解各種慢性疾病之效，提示它可能作用于免疫防御機(jī)制。鑒于巨噬細(xì)胞在此機(jī)制中的重要地位，本文主要觀察LZ對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的作用。我們將繼續(xù)報(bào)告LZ對(duì)IL-1與腫瘤壞死因子產(chǎn)生的影響。
材料和方法
動(dòng)物
昆明種小鼠，♂，20～26g，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部供應(yīng)。
試劑
靈芝的熱水浸出液由日本和漢生藥研究所提供，取定量靈芝提取物，經(jīng)研磨后溶于0.2%羧甲基纖維素鈉（CMC），80℃水浴振搖4h�；鞈乙汗┱w研究之用。進(jìn)行試管內(nèi)研究時(shí)取少量靈芝提取物，溶于NS于80℃水浴中振搖2h，離心1600rpm×10min，上清液稱為靈芝的水溶部分（Part A），放置于4℃待用。靈芝經(jīng)振搖后，快速置-30℃凍存，然后迅速于37℃溶解，如此反復(fù)凍融3次，離心1600rpm×10min，此上清液稱為靈芝的凍融部分（Part B）。
RPMI-1640購自GIBCO，含Hepes 15mmol/L，青霉素100 U/ml，鏈霉素100μg/ml，小牛血清（NCS）10%，2-巰基乙醇（2-ME）5×10-5mol/L。印度墨汁為Winsaw & Newton產(chǎn)品，墨汁：NS=1∶2。
試管內(nèi)研究巨噬細(xì)胞吞噬
小鼠腹腔注射2.5%硫乙醇酸鈉1ml致敏,4d后取腹腔細(xì)胞,洗2次,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至3×106/ml,加入內(nèi)有蓋玻片的小玻璃皿內(nèi)。1ml/皿，37℃ 5% CO2培養(yǎng)1h，棄去非粘附細(xì)胞。取新鮮綿羊紅細(xì)胞（SRBC）洗3次，調(diào)節(jié)成5% V/V的混懸液。于上述小玻璃皿中加入0.1ml血。同時(shí)在這單層培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞上再加入靈芝1～100μg/ml，每組復(fù)皿三個(gè)，輕輕振搖玻璃皿，使SRBC及藥物均勻分布。37℃再培養(yǎng)2h。取出蓋玻片，漂洗，以1∶1的甲醇丙酮溶液固定，按Giemsa染色。
整體研究巨噬細(xì)胞吞噬
小鼠隨機(jī)分4組，分別為CMC對(duì)照及給靈芝125，250及500mg/kg三組。每只小鼠腹腔注射2.5%硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基1ml，然后口服藥物，qd.×4，在最后一次給藥后2h，腹腔注射2% SRBC每鼠1ml。1h后處死，取腹腔細(xì)胞，加入內(nèi)有蓋玻片的小玻璃皿中，37℃培養(yǎng)1h，取出蓋玻片，漂洗，1∶1甲醇丙酮溶液固定，Giemsa染色。
碳廓清試驗(yàn)
小鼠隨機(jī)分成三組，一組作對(duì)照，口服0.2%CMC qd.×4靈芝組口服125，625mg/kg po. qd.×4。最后一次給藥后24h，尾靜脈注射1∶2印度墨汁0.1ml/10g。注射后，2，15min于眼靜脈竇取血30μl，置于含蒸餾水1.5ml的小試管內(nèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死小鼠，稱肝、脾重量。含血的標(biāo)本于600nm波長比色。按下列公式計(jì)算吞噬指數(shù)。
ω為體重，ωL.S為肝脾重量之和,K為斜率.
本實(shí)驗(yàn)以吞噬指數(shù)α估計(jì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系功能.
結(jié) 果
靈芝在試管內(nèi)對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的影響
表4-1表明靈芝的水溶部分，表4-2表明靈芝的凍融部分，在10～50μg/ml均明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬。但靈芝凍融部分的高濃度，即100μg/ml則顯示抑制作用（表4-2）。
表4-1 靈芝水溶液在試管內(nèi)對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
藥物濃度 吞噬百分率（%）
組 別 （μg/ml） Exp.1 Exp.2
對(duì)照組 22.6±2.8 19.5±2.2
靈芝組 1 23.2±3.2 20.0±2.5
靈芝組 10 29.4±1.8** 25.9±2.2**
靈芝組 25 35.6±4.6** 27.5±1.6**
靈芝組 50 37.1±3.6** 30.0±2.4**
靈芝組 100 40.5±4.2** 38.3±3.4**
對(duì)照組: RPMI-1460
X±SD;n=4; **P<0.01
表4-2 靈芝凍溶液在試管內(nèi)對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
藥物濃度 吞噬百分率（%）
組 別 （μg/ml） Exp.1 Exp.2
對(duì)照組 23.0±3.9 19.4±3.6
靈芝組 1 22.5±1.8 19.3±3.7
靈芝組 10 29.4±2.6* 27.0±3.0*
靈芝組 25 30.6±4.0* 31.1±2.5**
靈芝組 50 34.5±4.8** 38.7±2.4**
靈芝組 100 20.3±3.8 18.3±2.7
對(duì)照組: RPMI-1640
X±SD;n=4; *P<0.05, **P<0.01
靈芝對(duì)整體巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
口服靈芝125～500mg/kg qd.×4可以促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能,與試管內(nèi)結(jié)果一致(表4-3)。
表4-3 靈芝整體給藥對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
組 別 藥物濃度（mg/kg） 吞噬百分率（%）
對(duì)照組 -- 73.2±2.68
靈芝組 125 83.4±3.88**
靈芝組 250 89.1±2.20**
靈芝組 500 93.1±2.38**
對(duì)照組:0.2% CMC
X±SD; n=5; **P<0.01
靈芝對(duì)碳廓清試驗(yàn)的影響
結(jié)果證明口服靈芝125，625mg/kg qd.×4能促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮系功能，使碳粒清除加速（表4-4）。
表4-4 靈芝對(duì)碳廓清作用的影響
組 別 mg/kg 動(dòng)物（只） （α值Ｘ±SD）
對(duì)照 9 2.11±0.5
靈芝 125 8 2.92±0.4**
靈芝 625 8 2.53±0.9*
對(duì)照:0.2% CMC
X±SD; *P<0.05, **P<0.01
討 論
根據(jù)研究,我們設(shè)想靈芝為一種免疫調(diào)節(jié)劑，其對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，與其劑量及免疫系統(tǒng)的功能狀態(tài)有關(guān)。靈芝尚顯示雙向調(diào)節(jié)作用。本結(jié)果顯示靈芝可明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬以及加強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的功能。已知巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中很重要的一部分，不僅與特異性免疫有關(guān)，也與機(jī)體非特異性防御機(jī)制有關(guān)，靈芝促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的功能，可能聯(lián)系到其治療某些慢性疾病的效果。
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